關(guān)于動物細胞擴大培養(yǎng)的科研文獻分析  液氮罐

1.該實驗研究的目的或意義

利用動物細胞培養(yǎng)可以生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價值的酶、生長因子、疫苗和單抗等，已成為醫(yī)藥生物高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分，利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的生物制品已占生物高技術(shù)產(chǎn)品*的50%，為了培養(yǎng)規(guī)模的進一步擴大、優(yōu)化細胞培養(yǎng)環(huán)境、提高產(chǎn)品的產(chǎn)出率與保證其質(zhì)量，動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)已成為各生產(chǎn)企業(yè)發(fā)展至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。

2.為達到該目的采用的什么方法

根據(jù)動物細胞的類型和培養(yǎng)特性，大規(guī)模培養(yǎng)可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。

3.陳述該研究的結(jié)果

①貼壁培養(yǎng)：優(yōu)點：(1) 細胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養(yǎng)液，清洗后直接加入新培養(yǎng)液，容易更換培養(yǎng)液;

(2) 因細胞固定載體表面，不需過濾系統(tǒng)，容易采用灌注方式培養(yǎng)，從而達到提高細胞密度的目的;

(3) 當細胞貼壁于生長基質(zhì)時，細胞將更有效的表達一種產(chǎn)品;

(4) 同一設備可培養(yǎng)多種細胞，并根據(jù)需要采用不同的培養(yǎng)液和細胞的比例。

缺點：(1) 細胞繁殖貼壁后不易消化下來，培養(yǎng)的擴大比較困難;

(2) 培養(yǎng)設施占地面積大，設備投資大;液氮罐

(3) 采用細胞反應器培養(yǎng)，細胞無法進行顯微鏡觀察，不能有效監(jiān)測細胞的生長狀態(tài);

(4) 在測定和控制細胞所處環(huán)境的*均勻化方面比較困難。

②懸浮培養(yǎng)：優(yōu)點：(1) 操作簡單、培養(yǎng)條件均一、便于進行定量研究;

(2) 傳質(zhì)和傳氧比較好，有利于細胞與培基中的營養(yǎng)物質(zhì)和氣體充分接觸，而且易于控制培養(yǎng)條件(溫度、pH、氧分壓和CO2等);

(3) 它們在離體培養(yǎng)時不需要附著物，只需懸浮于培養(yǎng)液中就可以良好生長;

(4) 懸浮培養(yǎng)法細胞增殖快，產(chǎn)量高，設備結(jié)構(gòu)簡單;

(5) 細胞傳代時不需要再分散，只需按比例稀釋即可繼續(xù)培養(yǎng)。可借鑒細菌發(fā)酵的經(jīng)驗，容易擴大培養(yǎng)規(guī)模，可連續(xù)擴大生產(chǎn)量;

(6) 易于在連續(xù)密閉的系統(tǒng)中進行，減少了操作步驟和污染的機會。

③固定化培養(yǎng)：吸附法、包埋法、共價貼附法、微囊法、離子/共價交聯(lián)法

4.該實驗的創(chuàng)新點及不足

該實驗的方法創(chuàng)新點在于方法較為全面，優(yōu)缺點分明，不足之處在于方法比較通用，沒有什么特別亮點的培養(yǎng)方法。

5.你在改實驗基礎上繼續(xù)研究的設計思路

既然大規(guī)模培養(yǎng)了細胞，如何能保存細胞也是一個問題，所以我想從保存細胞方面繼續(xù)設計研究。大概的試驗方法如下：

①.挑選細胞：選擇生長旺盛期, 細胞界限清楚, 立體感強, 形態(tài)良好的細胞。

②.消化細胞： 按細胞的常規(guī)消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.營養(yǎng)液(不含

血清), 以1000r/min,離心20分鐘，棄上清。

③.凍存懸液的制備： 將離心后沉淀的細胞收集起來, 加入適量凍存液, 輕輕吹打數(shù)次, 制成細胞懸液。

④.分裝封口： 將上述懸液分裝于安瓶內(nèi), 每支安靚裝1 毫升, 火焰封口, 貼好標記, 裝入紗布袋中。

⑤.梯度降溫： 將嚴密封口加注標記的細胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小時, 然后放入氣態(tài)冷凍30分鐘，使其降至-70℃以下，再直接浸入液氮中凍存。

⑥.復蘇培養(yǎng)：復蘇細胞時, 從液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并適當搖勻, 使其在1分鐘內(nèi)融化*。在無菌條件下打開安瓶,將細胞懸液移入培養(yǎng)瓶中,1ml細胞懸液加20ml培養(yǎng)液, 然后放入37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 次日更培養(yǎng)1次。

⑦.觀察結(jié)果：觀察復蘇培養(yǎng)的細胞的生民貼壁狀態(tài)、細胞生長繁殖速度和細胞傳代能力。如果細胞貼壁良好, 仍能繼續(xù)傳代下去, 其生長速度與凍前比較無明顯差異, 則可認為凍存結(jié)果比較滿意。液氮罐